Prinsip Sintesis Asam Nukleat

Sintesis asam nukleat dilakukan dengan menggunakan metode trigliserida sialic amide fase padat, dimana ujung 3′ DNA diimobilisasi pada substrat fase padat dan nukleotida ditambahkan dalam arah 3′ hingga 5′ hingga fragmen DNA yang diinginkan disintesis. .Ini berbeda dengan sintesis DNA melalui penerapan DNA polimerase.

Ujung 3′ dari basa pertama diimobilisasi pada CPG selama sintesis, 5′-OH dari basa berikutnya dilindungi dengan di-p-tolyl trityl DMT, gugus amino pada basa dilindungi dengan asam benzoat dan 3′ -OH kemudian diaktifkan dengan senyawa amino fosfat.1 basa dari 5 5′-OH dari 1 basa dan 3′-OH dari basa berikutnya membentuk trigliserida fosfit, yang kemudian dioksidasi dengan yodium menjadi trigliserida fosfat, pelindung pada basa kedua 5′-OH dihilangkan dengan cara menambahkan siklus DM asam dikloroasetat melalui penambahan basa berikutnya, dan setelah sintesis, pelindung pada 5′-OH dihilangkan dengan asam lemah. Fragmen dipisahkan dari resin padat dengan amonium hidroksida pekat, pelindung dihilangkan dari basa dengan amonium hidroksida pekat di bawah pemanasan, amonium hidroksida dihilangkan, fragmen dikeringkan dengan vakum, dan asam nukleat dimurnikan dengan kromatografi cair atau PAGE.

Langkah Sintesis Oligo

Membatalkan blokir

ItuGrup pelindung DMT 5 ujung dihilangkan dengan menambahkan solusi TCA.

Pengaktifan

Mencampur aktivator dengan monomer oligonukleotida untuk membentuk zat antara monomer oligonukleotida aktif.

Kopel

Gugus hidroksil 5 terminal bereaksi dengan zat antara oligonukleotida aktif dalam reaksi kondensasi anti-generatif untuk membentuk ikatan trigliserida fosfit yang tidak stabil.

Pembatasan 

Penambahan zat penutup melakukan reaksi pembatasan asetilasi dengan kelebihan gugus hidroksil yang tidak terlibat dalam reaksi kondensasi.

Oksidasi 

Penambahan larutan yodium yang mengandung air bereaksi dengan ikatan fosfit yang tidak stabil melalui oksidasi membentuk ikatan trigliserida asam fosfat yang stabil.

Pembelahan Sianoetil

Produk asam nukleat setelah sintesis, dengan penambahan larutan DEA untuk menghilangkan gugus sianoetil dari ikatan trigliserida fosfat.

Dibelah & Deproteksi

Fragmen asam nukleat dibelah dari pembawa fase padat dengan menambahkan larutan amonium hidroksida pekat dan kemudian dipanaskan untuk menghilangkan gugus pelindung dari ikatan hidrogen basa.