Prinsip dasar sintesis DNA

Sintesis kimia DNA didasarkan pada strategi sintesis fase padat dan kimia fosforamidit.Berbeda dengan sintesis DNA biologis, bahan dalam sintesis DNA kimia adalah DMT (4, 4-dimetoksitritil) dan deoksiriboksisida termodifikasi fosforamidit, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1. Sintesis DNA dilakukan pada penyangga padat (kami dapat menawarkan berbagaiKolom Sintesis Oligo), yaitu CPG (kaca pori terkontrol) dan PS (polistiren), dan seluruh sintesis dilakukan pada aPenyintesis DNA/RNA, yang merupakan peralatan utama kami, memiliki model berbeda seperti: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 dan lain-lain, arah sintesisnya dari 3' hingga 5', dan nukleotida dimasukkan ke pendukung padat melalui satu siklus sintesis.Siklus sintesis biasanya berisi empat langkah, Deproteksi, Kopling, Pembatasan, dan Oksidasi (Gambar 2).Deproteksi diatur untuk menghilangkan gugus DMT pada penyangga padat atau gugus hidroksil 5' pada nukleosida sebelumnya, asam trikloroasetat 3% dalam diklorometana digunakan sebagai reagen deproteksi.Kemudian deoksiriboksisida termodifikasi fosforamidit dibiarkan mengekspos gugus hidroksil dengan bantuan aktivator, yaitu 5-ethylthiotetrazole atau 4, 5-dicyanoimidazole, membentuk fosfittriester (III), dan merealisasikan langkah Kopling.Langkah Capping dilakukan untuk memblokir gugus hidroksil yang tidak bereaksi selama langkah penggandengan, untuk meminimalkan pembentukan rangkaian cacat yang tidak diinginkan.Akhirnya, fosfittriester (III) yang tidak stabil dioksidasi menjadi fosfortriester (V) yang stabil secara kimia dengan yodium sebagai oksidan dengan adanya piridin.

DNA yang disintesis dapat dibelah dari pendukung padat melalui aminolisis, gugus terlindung 2-sianoetil pada fosfortriester dan urea pada nukleobase dibelah pada saat yang sama, Pelat Sintesis dan Kolom Sintesis di rak ditempatkan langsung di ruang reaksi dariPeralatan Deproteksi.DNA kasar dapat disiapkan dengan HPLC, elektroforesis, dan OPC sesuai permintaan, kami juga dapat menyediakannya untuk AndaPeralatan Pemurnianuntuk Pasca-pemrosesan.